RNA1.80通常指的是RNA样品的A260/A280比值。这个比值是用于评估RNA纯度的一个重要指标。具体来说,A260/A280比值在1.82.0之间被认为是较为理想的,表示RNA样品的纯度较高,没有明显的蛋白质或酚类物质的污染。
以下是一些关于RNA1.80的详细信息和常见问题:
1.纯度标准:
A260/A280比值在1.82.0之间表示RNA纯度较高,适合用于下游的实验,如逆转录和PCR扩增。
如果比值低于1.8,可能表示有蛋白质或酚类物质的污染。
比值高于2.0则可能表示RNA有降解。
2.常见问题:
蛋白质污染:如果RNA样品中含有蛋白质,A260/A280比值会偏低。可以通过增加异丙醇用量和使用乙醇多次洗涤来减少蛋白质污染。
酚类物质污染:酚类物质也会导致A260/A280比值偏低,可以通过改进提取方法来减少污染。
RNA降解:RNA降解会导致A260/A280比值偏高。可以通过优化提取条件和使用液氮研磨样品来减少降解。
3.提取方法:
常见的RNA提取方法包括TRIzol法和吸附法。这些方法各有优缺点,但都不能保证提取的RNA样本一定合格,因此提取完成后应测定RNA的浓度及吸光度。
4.质量评估:
除了A260/A280比值,还可以通过琼脂糖凝胶电泳来评估RNA的完整性。好的RNA通常有28S、18S和5S三条带,其中28S的亮度是18S的两倍。
对于实时定量PCR,A260/A280比值的要求可以相对宽松一些,有时甚至1.5的比值也可以接受。
RNA1.80是评估RNA纯度的一个重要指标,通过优化提取方法和检测手段,可以提高RNA样品的质量,确保后续实验的顺利进行。你有没有遇到过这样的情况:DNA的OD值测定260/280大于1.80,心里美滋滋地以为RNA污染的问题解决了,结果电泳一看,哇塞,最下面那条明亮的条带是啥玩意儿?别急,今天就来聊聊这个RNA的小秘密,让你对它有更深的了解。
RNA的影子:260/280比值之谜

你可能会想,既然DNA和RNA的260/280比值接近,那测个OD值不就万事大吉了?事情可没这么简单。RNA的260/280比值虽然和DNA相似,但并不能完全排除RNA污染的可能。因为RNA的吸收峰和DNA重叠,所以单纯依靠OD值来判断RNA污染并不可靠。
电泳下的真相:RNA的“幽灵”

那么,如何才能准确地判断RNA污染呢?这时候,电泳就派上用场了。电泳可以直观地展示RNA的含量,尤其是那些分生组织提取的DNA,RNA污染往往比较严重,电泳图上RNA的条带甚至可能比DNA的还要明显。
组织生长状态:RNA污染的“幕后黑手”

你知道吗,RNA污染其实和提取的组织生长状态有很大关系。比如,分生组织等提取的DNA,RNA污染就比较严重;而种子、孢子等休眠组织,由于生命活动并不旺盛,提取的DNA就很可能看不到任何RNA污染的迹象。所以,有时候你看不到不代表没有,只是它隐藏得太深了。
RNA降解:DNA条带下的“幽灵”
还有一点需要注意,如果提取过程中RNA降解了,你会在DNA条带下面看到一片很亮的拖带。这是因为降解的RNA片段在电泳时也会移动,从而形成一条明显的条带。
如何应对RNA污染:转染试剂的选择
既然RNA污染这么麻烦,那我们该如何应对呢?这时候,转染试剂的选择就变得尤为重要了。市面上有很多种转染试剂,比如赛默飞的Lipo3000、RNAiMAX和真核生物的EukaryCellsiRNA转染试剂等。
其中,RNAiMAX是国际公认的siRNA转染试剂权威产品,而EukaryCellsiRNA转染试剂则是国产的佼佼者。EukaryCellsiRNA转染试剂的最大突破就是专门配置了TransEnhancer,也就是siRNA转染增强剂,可以有效降低细胞膜的免疫排异反应,同时显著提升siRNA转染的效率。
:RNA污染的“克星”
RNA污染是个让人头疼的问题,但只要我们掌握了正确的方法,就能轻松应对。记住,选择合适的转染试剂,关注组织生长状态,以及电泳观察RNA污染情况,都是我们战胜RNA污染的“克星”。
说了这么多,你是不是对RNA有了更深的了解呢?下次遇到RNA污染的问题,可别再手忙脚乱了哦!